Detecção celular: citometria de fluxo, FACS e CyTOF
TL;DR
Citometria de fluxo mede marcadores na superfície ou dentro de células individuais em suspensão. FACS adiciona sorting, permitindo coletar células selecionadas. CyTOF/citometria de massa troca fluoróforos por etiquetas metálicas, aumentando o número de marcadores, mas perdendo sorting de células vivas. Esses métodos são centrais para imunofenotipagem, leucemias/linfomas, microambiente tumoral e manufatura de terapia celular. Fontes: [1], [2]
O que mede
| Medida | Exemplo |
|---|---|
| tamanho/granularidade | FSC/SSC |
| marcadores de superfície | CD3, CD4, CD8, CD19, PD-1 |
| proteínas intracelulares | FOXP3, citocinas, fosfo-sinalização |
| viabilidade | corantes live/dead |
| ciclo celular/DNA | corantes de DNA |
| função | degranulação, captura de citocina, proliferação |
Flow vs FACS vs CyTOF
| Método | Melhor para | Ressalva |
|---|---|---|
| Citometria de fluxo | perfil celular multiparamétrico rápido | compensação, autofluorescência |
| FACS | sorting de populações viáveis | estresse, troca pureza/rendimento |
| CyTOF | perfil imune de alta dimensão | sem recuperação viva, menor throughput |
Saídas comuns
- arquivos FCS
- matriz de compensação
- hierarquia de gating
- matriz de intensidade de marcadores
- rótulos de clusters
- metadados de células sortidas
- QC de viabilidade e doublets
Modos de falha
- painel de anticorpos mal desenhado
- sobreposição espectral ou erro de compensação
- artefatos de células mortas
- doublets
- batch effects
- gating manual excessivo
- viés de dissociação tecidual
- perda de tipos celulares frágeis ou aderentes
Notas para desenvolvedores
- Arquivos FCS devem ser armazenados com metadados de painel e matrizes de compensação/spillover.
- Gating é uma decisão analítica; preserve hierarquia e limiares.
- Correção de batch não recupera tipos celulares perdidos na dissociação.
- Intensidade de marcador não é comparável entre instrumentos sem controles.
- Populações sortidas precisam de metadados de pureza, rendimento e viabilidade.
- Clustering automático deve ser conferido contra biologia conhecida e gates manuais.
Referências
- Chan A, Au R, Gao Q, et al. Role of flow cytometric immunophenotyping in the diagnosis of breast implant-associated anaplastic large cell lymphoma. Cytometry B Clin Cytom 2024;106:117-125. PMID 38297808. https://doi.org/10.1002/cyto.b.22162
- Bendall SC, Simonds EF, Qiu P, et al. Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum. Science 2011;332:687-696. PMID 21551058. https://doi.org/10.1126/science.1198704